疏水层析中的蛋白洗脱

蛋白质结合于填料之后，必须再将目标蛋白质洗脱，并收集层析柱柱后的流出液。多数情况下，洗脱过程用于将不需要的蛋白质从目标蛋白质中分离或者去除。不需要的蛋白质可能与填料结合的不是那么紧密，因而会先于目标蛋白质被洗脱。另外一些情况下，不需要的蛋白质会与填料结合更加紧密，并会在目标蛋白被洗脱之后仍与填料结合。这种情况通常发生在疏水层析法（HIC）分离蛋白质多聚体时，目标蛋白多聚体与填料的结合比单体与填料的结合更加紧密。在洗脱过程中，流出液组分可能含有高纯度产品，但在其之前或之后也会含有大量的不需要的蛋白质杂质。洗脱过程（梯度洗脱）如图所示，该图说明用HIC分离纯化时，在洗脱步骤中，应将柱后流出液进行等份收集，这样才可以获得适宜纯度的产品。

洗脱过程可采用等度或梯度的方式进行。4种最常见的洗脱结合蛋白质的方法如下：

1、降低盐浓度（相对于结合条件）

盐浓度的降低会相应地减弱蛋白质和配基间的疏水作用，进而蛋白质被解吸附并从层析柱上洗脱下来。

2、加入有机溶剂

有机溶剂（如乙烯或丙二醇）的加入可以改变溶液的极性，从而可以干扰疏水作用。

3、提供盐浓度（采用离液盐）

离液盐的加入可以干扰疏水作用。

4、加入去污剂

去污剂可以用做蛋白质置换剂，主要用于HIC纯化膜蛋白。

在洗脱步骤中，将蛋白质从HIC填料上洗脱的zui常用方法是降低盐浓度。用HIC纯化新的蛋白质组分时，同样首先采用该方法。上述其他方法的缺点在于，需要额外加入物质，而这些物质可能影响蛋白质的稳定性。但是，洗脱与填料结合比较紧密的蛋白质时，还是需要这些试剂的。

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