亲和层析中的蛋白洗脱

从亲和层析填料上洗脱结合靶标是结合的可逆过程，需优化条件，削弱靶标和配基之间的相互作用。洗脱条件不应使靶蛋白变性，除非这些条件与下游程序兼容。

有两种类型的洗脱方法，即特异性洗脱和非特异性洗脱。

特异性洗脱过程中，介质或竞争配基或竞争靶标，通过这种形式攻击蛋白质-配基复合物，继而将靶蛋白释放至溶液中。用于洗脱的竞争介质的浓度和量（体积）依赖于其亲和力，这种亲和力与固定复合物的亲和力相关。与亲和力强的添加物相比，竞争介质的结合越弱越需要更高的浓度和更大的体积。对于弱的竞争介质，比配基高10倍是较好的浓度起点。特异性洗脱通常是温和的，更可能保留蛋白质的活性。这种方法的缺点在于：洗脱慢、洗脱峰宽、需要从回收的蛋白质中去除竞争介质。

对于非特异性洗脱，需根据配基与蛋白质之间的相互作用机制优化洗脱条件，如增加盐浓度、降低离子相互作用或通过改变pH来改变质子化/离子化状态，从而调节氢键强度、疏水相互作用及静电相互作用。从固定的Protein G上洗脱抗体就是一个改变pH的例子，然而Protein G与抗体的亲和力非常强，需要不同洗脱条件组合达到zui大程度的抗体释放。通常，亲和作用需要靶蛋白正确地三维折叠，因此离液剂或影响蛋白质折叠的试剂可用于洗脱目标蛋白质，但是，必须注意保证靶标的正确折叠在洗脱后迅速恢复天然条件。当亲和力弱时，高浓度靶分子结合后，通过稀释以解离、洗脱复合物。

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